肽工艺

蛋白质的分离方法之——根据特异性与带电性

发表时间:2019-03-01 14:00

       除了之前提过的蛋白质分离纯化方法,我们还可以根据蛋白质的带电性质与蛋白质的配体特异性对蛋白质进行分离纯化,而跟据这两种方法进行的蛋白质分离纯化,又各自具有它的独特性质。
 
       电解法是以蛋白质带电性质为基础的分离方式
       因为蛋白质在不同pH环境中带电性质和电荷数量不同,可将其分开,所以我们常利用这个特性来进行蛋白质的分离,我们把它称为电解蛋白质,而电解蛋白质又可以分为电泳法跟离子交换层析法。电泳法主要是利用各种蛋白质在同一pH条件下,分子量和电荷数量不同会使其在电场中的迁移率不同,从而导致蛋白质的分离。离子交换层析法是利用离子交换剂(阳离子交换剂和阴离子交换剂),当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时,带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上,随后用改变pH或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来。
 
蛋白质的分离方法之——根据特异性与带电性
 
       亲和色谱法是根据配体特异性的分离方法
       亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法,它操作简单,得到的蛋白质纯度高。亲和层析法是通过某些蛋白质与另一种称为配体的分子能特异而非共价地结合。其重要的细胞的破碎过程包括以下几点:
 
       (1)高速组织捣碎:将材料放置仪器上,以达到要求的速度,然后快速捣碎。
 
       (2)玻璃匀浆器匀浆:捣碎的组织放置仪器上,利用玻璃棒将其研碎。
 
       (3)超声波处理法:用一定功率超声波处理悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法在处理中产生大量热,应采取降温措施。
 
       (4)反复冻融法:细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复,细胞内冰粒形成,剩余细胞液盐浓度增高,细胞结构破碎。
 
       (5)化学处理法:有些动物细胞可采用十二烷基磺酸钠、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。
 
      
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